Immunohistochemical analysis of retinoblastoma cell phenotype using neuronal and glial cell markers / Análise imuno-histoquímica do fenótipo de células de retinoblastoma utilizando marcadores de células neuronais e gliais

ABSTRACT Purpose: The cellular origin of retinoblastoma is uncertain as constituent tumor cells heterogeneously express markers of both immature and mature retinal cells. An immunohistochemical analysis of cellular origin may yield valuable insights into disease progression and treatment options. This study aimed to determine the cellular origin of retinoblastoma in a large case series and correlate these findings with histopathological prognostic factors. Methods: Thirty-nine retinoblastoma cases were histopathologically diagnosed and analyzed by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against the immature neural cell marker SRY-box containing gene 2 (SOX-2), the mature neuronal cell marker microtubule-associated protein 2 (MAP2), and the mature glial cell marker glial fibrillary acidic protein (GFAP). Histopathological features were also evaluated, including patterns of growth, differentiation, vitreous seeding, and choroidal/scleral, optic nerve, and anterior chamber invasion. Two retinoblastoma cell lines, WERI-1 and Y79, were studied by immunocytochemistry using the same antibodies. Results: Expression of SOX-2 was strong in 97.4% of retinoblastoma cases, while MAP-2 was expressed in 59% of cases. Immunostaining for GFAP was positive only in reactive stromal astrocytes interspersed amongst tumor cells and in peritumoral tissue. There was no correlation between histopathological prognostic factors and immunohistochemical markers. Retinoblastoma cell lines showed strong positivity for SOX2 (90% of WERI-1 cells and 70% of Y79 cells) and MAP2 (90% of cells in both lines). GFAP was completely negative in both cell lines. Conclusion: The majority of retinoblastomas and both RB cell lines expressed an immature neural and/or a mature neuronal cell marker, but not a glial marker. These results indicate a typical neuroblast or neuronal origin and eliminate astrocyte differentiation from neural stem cells as the source of retinoblastoma.

RESUMO Objetivos: Este estudo visa determinar a origem do retinoblastoma em um número de casos e correlacionar essos achados com fatores prognósticos e histopatológicos conhecidos. Métodos: Trinta e nove casos de retinoblastoma foram diagnosticados e analisados com imuno-histoquímica usando marcadores de anticorpos monoclonais contra as células de retina imaturas (SOX-2: SRY-box containing gene 2), contra as células da retina maturas (MAP2: microtubule -associated protein 2) e contra as células gliais maturas (GFAP: glial fibrillar acidic protein). Foram avaliadas características microscópicas dos casos (grau de diferenciação, presença de semeadura vítrea, invasão de coroide/esclera, nervo óptico e câmara anterior). Duas linhas celulares de retinoblastoma (WERI-1 e Y79) também foram testadas, utilizando os três marcadores. Resultados: A expressão de SOX-2 foi positiva em 97,4% dos casos de retinoblastoma, enquanto MAP2 foi positivo em 59% dos casos. GFAP foi apenas positivo no estroma (astrócitos reativos). Não houve correlação entre preditores histopatológicos e marcadores imunohistoquímicos avaliados. As linhagens celulares mostraram positividade para SOX-2 (90% em WERI-1 e 70% das células Y79). Ambas as linhagens celulares se mostraram fortemente positivas con MAP2 (90%), enquanto não houve expressão de GFAP em nenhuma das linhas celulares estudadas. Conclusões: A maioria das células de retinoblastoma desta série de casos expressa marcadores de células retinianas imaturas, além de marcadores de células maduras. As linhas celulares Y79 e WERI-1 apresentaram imunomarcação para ambos os marcadores neurais em percentagens semelhantes a dos casos avaliados. Portanto, estes resultados confirmam a origem neural do tumor em particular. Alem disso, a ausência de células positivas para GFAP no tumor descarta diferenciação de astrócitos em retinoblastoma.

Corneal stromal dystrophies: a clinical pathologic study / Distrofia corneana estromal: um estudo clínicopatológico

INTRODUCTION: Corneal dystrophy is defined as bilateral and symmetric primary corneal disease, without previous associated ocular inflammation. Corneal dystrophies are classified according to the involved corneal layer in superficial, stromal, and posterior dystrophy. Incidence of each dystrophy varies according to the geographic region studied. PURPOSE: To evaluate the prevalence of stromal corneal dystrophies among corneal buttons specimens obtained by penetrating keratoplasty (PK) in an ocular pathology laboratory and to correlate the diagnosis with patient age and gender. METHODS: Corneal button cases of penetrating keratoplasty from January-1996 to May-2009 were retrieved from the archives of The Henry C. Witelson Ophthalmic Pathology Laboratory and Registry, Montreal, Canada. The cases with histopathological diagnosis of stromal corneal dystrophies were stained with special stains (Peroxid acid Schiff, Masson trichrome, Congo red analyzed under polarized light, and alcian blue) for classification and correlated with epidemiological information (age at time of PK and gender) from patients' file. RESULTS: 1,300 corneal buttons cases with clinical diagnose of corneal dystrophy were retrieved. Stromal corneal dystrophy was found in 40 (3.1%) cases. Lattice corneal dystrophy was the most prevalent with 26 cases (65%). Nineteen were female (73.07%) and the PK was performed at average age of 59.3 years old. Combined corneal dystrophy was found in 8 (20%) cases, 5 (62.5%) of them were female and the average age of the penetrating keratoplasty was 54.8 years old. Granular corneal dystrophy was represented by 5 (12.5%) cases, and 2 (40%) of them were female. Penetrating keratoplasty was performed at average age of 39.5 years old in granular corneal dystrophy cases. Macular corneal dystrophy was present in only 1 (2.5%) case, in a 36 years old female. CONCLUSION: Systematic histopathological approach and evaluation, including special stains in all stromal corneal dystrophies is critical to establish the correct diagnosis.

INTRODUÇÃO: A distrofia corneana é definida como doença primária da córnea, bilateral e simétrica, sem associação com inflamação ocular prévia. Distrofias corneanas são classificados de acordo com a camada corneana envolvida em distrofia superficial, estromal e posterior. A incidência de cada distrofia varia de acordo com a região geográfica estudada. OBJETIVO: Avaliar a prevalência de distrofias corneanas estromal em botões corneanos de espécimes obtidos por ceratoplastia penetrante (CP), oriundos do arquivo de um laboratório de patologia ocular e correlacionar o diagnóstico com a idade e o sexo dos pacientes. MÉTODOS: Os botões corneanos oriundos de ceratoplastia penetrante recebidos entre janeiro de 1996 e maio de 2009 foram selecionados dos arquivos do Henry C. Witelson Ocular Pathology and Registry Laboratory, em Montreal, Canadá. Os casos com diagnóstico histopatológico de distrofias corneanas estromal foram corados com colorações especiais ("Peroxid acid Schiff", tricrômico de Masson, vermelho Congo analisadas sob luz polarizada, e "alcian blue") para a classificação e foram correlacionados com dados epidemiológicos (idade na época da ceratoplastia penetrante e sexo) dos pacientes. RESULTADOS: 1.300 casos de botões corneanos com diagnóstico clínico de distrofia corneana foram recuperados. Distrofia corneana estromal foi encontrada em 40 (3,1%) dos casos. Distrofia corneana lattice foi a mais prevalente com 26 casos (65%). Dezenove eram do sexo feminino (73,07%) e CP foi realizada em média com 59,3 anos de idade. Distrofia corneana combinada foi encontrada em 8 (20%) casos, 5 (62,5%) eram do sexo feminino e a idade média da CP foi de 54,8 anos. Distrofia corneana granular foi encontrada em 5 (12,5%) casos, e 2 (40%) deles eram do sexo feminino. A ceratoplastia penetrante foi realizada na média de idade de 39,5 anos, em casos de distrofia corneana granular. A distrofia corneana macular esteve presente em apenas um caso (2,5%), 36 anos de idade do sexo feminino. CONCLUSÃO: A abordagem histopatológica e avaliação sistemáticas, incluindo colorações especiais em todas as distrofias corneanas é essencial para estabelecer o correto diagnóstico.